BL21 Star(DE3)感受态细胞

产品货号：

SN0074

中文名称：

BL21 Star(DE3)感受态细胞

英文名称：

CheCom BL21 Star(DE3)Chemically Competent Cell

产品规格：

100μL×10

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

BL21 Star(DE3)感受态细胞经优化的感受态制备工艺制作而成，可用于DNA的化学转化。BL21 Star(DE3)菌株来源于BL21 (DE3)菌株，感受态细胞内含有rne131基因突变（编码RNaseE），RNase E是参与mRNA降解的核心酶之一，故该基因突变可显著增强mRNA的稳定性，从而提高异源蛋白产量。主要适用于低拷贝的T7启动子表达载体（如PET系列）的高水平蛋白表达，同时含有大肠杆菌RNA聚合酶，也可用于非T7启动子表达载体（如pGEX系列）的蛋白表达。由于该菌株中mRNA稳定性的提高，BL21 Star (DE3)具有更高的基本表达，因此不适合表达毒性蛋白。

基本信息：
基因型：F- ompT hsdSB(rB-,mB-) gal dcm rne131 (DE3)。
转化效率：使用pUC19质粒DNA检测，转化效率高达1×10⁸ cfu/μg。

适用范围：
适用于DNA的化学转化、蛋白表达等实验，适用于T7和非T7启动子表达载体的蛋白表达。

产品组成：

组分	规格
BL21 Star(DE3)感受态细胞	100μL×10
pUC19对照载体(10pg/μL)	10μL

保存：-80℃，有效期6个月。

注意事项：

请勿将感受态反复冻融。
感受态细胞应插入冰上缓慢融化（请勿用手握化）后立即加入目的DNA，此时转化效率最高。
感受态细胞融化后长时间置于冰上不加目的DNA会降低转化效率。
加入目的DNA时应轻柔操作。
目的DNA不能超过感受态总体积的1/10。
不适合毒性蛋白的表达。

使用方法：

取100μL冰上融化的感受态细胞，加入目的质粒，轻柔混匀，冰上静置30min。
42℃水浴热激45s，迅速冰上静置2min。
注意不要晃动离心管，以免降低转化效率。
向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基（2×YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏1h。
根据实验需求吸取不同体积的感受态细胞加到含有相应抗生素的2×YT或LB固体培养基上，均匀涂开后吹干平板。
将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

常见问题：

转化后平板不长菌或长菌数较少？
- 建议检查上游质粒质量、反应温度及时间是否合适。
- 感受态细胞失效或效率降低。使用新鲜感受态细胞，感受态请勿反复冻融，建议使用本制品中附带pUC19质粒做一组阳性对照实验。
- 抗生素存在问题。检查抗生素是否失效，抗生素种类、用量是否正确，建议重新配制平板重复实验。
转化后平板出现卫星菌落或杂菌？
- 抗生素存在问题。检查抗生素是否失效，用量是否正确，氨苄抗性可适当提高抗生素浓度。
- 培养温度或时间不合适。检查培养箱温度，37℃培养时间不宜过长。
- 存在污染。感受态细胞在操作过程中被污染，建议做一组阴性对照实验（不加DNA只转化空感受态于抗性平板）检查操作过程是否污染了相同抗性的菌株。若存在污染，建议更换试剂及耗材，可使用核酸清洁剂对实验台面、环境进行清洁。

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